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[技术方法] 大鼠阴道涂片及受孕的相关知识

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发表于 2011-7-6 13:41:31 | 显示全部楼层 |阅读模式

& l. f8 V3 S6 X' p1.关于SD大鼠的选择
# |2 `9 N' z$ I5 M6 c! K性成熟期约为8周,体重240-280g左右(雌250g,雄300g)
( s9 B3 {) A2 M最适交配时间:雄鼠,90日龄,约400g4 ^6 y& A1 I: o" W
雌鼠,80日龄,约300g* P% f" ~  N" N. b3 T7 t
理论上性成熟后交配没有问题,但是考虑到成功率的高低,建议在最适时间交配。 尤其有资料指出雌鼠的体重过轻容易影响胎鼠的质量。
  P2 p$ o3 S, F: ]5 C2 k我们实验室雌鼠体重偏轻,约200-250g,但是受孕过程也很顺利,胎鼠也没有明显异常。% G$ e; W9 l% ~0 u, B& S, f

- X  x" {/ G7 P% x: Q% S" w6 `9 d2.关于受孕前后的饲养
9 G' ]2 \) F0 G" v/ n7 D饲料:除常规大鼠饲料外,可添加瓜子和鸡蛋。瓜子是生的葵瓜子,不用去壳,它们很会剥;鸡蛋是白煮,老鼠尤其爱吃蛋黄。饮水中可添加维生素E。4 J/ U. @- G9 Z- @" E, D3 F
合笼:傍晚合笼,次晨分笼,检查是否交配。/ g4 q/ l+ n: ~& G% X
  ~. r( T" Q3 U& B
3.关于检查受孕与否的方式6 ?0 W& ]9 C/ B* w4 d
1)有资料说雌鼠的阴道口随动情周期有所变化,但我想一般人难以分辨;7 S% \; N) H$ S- i) H
2)检查阴栓有很多人提到过,不过如果检查的时间迟了点,阴栓极有可能已脱落,反正我是一次没见到过;如果是有底铺垫料的鼠笼,估计也没人能找到脱落的阴栓。
7 Q& c. }$ ^$ b5 {4 ], k- p9 }3)阴道涂片,我想是最实用,成功率最高的了。下面会详细介绍...
- s7 Q0 s' ]  ]0 ?  t" W. n
+ x% G: ~7 A! m$ V涂片可以不用染色,基本能分辨。
6 ^! s+ a4 [( q; j2 d6 Y1.动情间期/静止期- O3 r& O2 y: F* [
7 X6 r' \+ M9 `, X/ D$ h' {6 Y9 H
大部分为白细胞,混有少量较小的有核扁平上皮细胞
, {( K; F8 w" V2 H  f
1 Z- A# n. b' |$ U2 V) W; W  d+ E: o" c5 ~
2.动情间期向动情前期发展4 f6 J% k4 g! u, t9 t

7 T: J0 L4 ?5 j# l; c4 f膨大的椭圆形的有核上皮细胞逐渐出现,增多
1 L, h. b" n1 I" h: l+ M( U4 n& K) n8 `$ N  i, b4 r3 s0 q! k
; W4 Q  p# i1 i, i0 L, R+ `' P% D
3.动情前期
# o( E7 Q3 ^% H
( N- C* X! I: v* F  I/ z; Y; ^6 \& U大部分为膨大的椭圆形有核上皮细胞
2 p+ A  A+ C4 _! \( [' i. U- l- Y# h) b

/ a3 V0 j# ~- K5 K4.动情期
9 E) ?; [6 K2 j7 B* r7 w' g; y9 Q" {. \3 E# `, k
膨大的上皮细胞核消失,成为鳞状脱落的角化上皮细胞,并聚堆,似落叶
6 A% A$ P% n9 k6 Q0 S/ `
; X+ E; K# J1 Y- y  y2 _: Q9 F/ S% s
( m7 m+ c3 ?) o& g$ @5 @" ^/ o% n1 j5 X% o. I1 ^

& D" S& e8 @. y8 o6.动情后期5 \2 M$ {1 g* G
/ v7 v6 f# c8 a: [
大部分白细胞,混有少量角化上皮细胞;
( e& V* j7 k! j1 o$ m& c7 B: G成功交配过的会看到大量精子细胞(头天下午5点合笼,次日中午12点才查的涂片,依旧能发现不少精子细胞),所以用此方法确定是否交配比较准确。
2 Z* k5 P7 ^( [6 r5 V: x6 k8 [7 h5 }; D7 q7 |2 O7 \& Y6 E

+ T7 W3 e2 b- \( Y/ ?看阴道涂片的经验总结:
5 h5 J/ n9 C) D! J; d6 Y$ N由于个人涂片的时间和技术不一样,老鼠的周期也不是每只都相同,而且周期之间是逐渐变化,没有明显界限,所以不容易看到典型周期的典型涂片。最好是每天做一到两次,观察变化的规律。
0 r) A- q( Z4 l+ y2 L当白细胞的比例逐渐降低,有核上皮细胞,角化的鳞状上皮细胞越来越来多,持续2天(动情前期,动情期)接近满视野的时候,合笼多会发生交配。一旦角化的细胞变少,白细胞比例增多,说明已经开始进入动情后期,动情间期,如果没有合笼,或合笼后涂片中未发现精子,你多半只有再等待下一轮周期了。
- D6 p2 g& N6 Q5 [0 A: V, F9 l有同学说如果动情间期持续3天以上,可能是已怀孕但是漏检了。我想还是蛮有道理的,不过漏掉精子并不容易。我有一次头天下午5点将其合笼,次日中午12点才查的涂片;而且那次不知什么原因笼底积水,第二天中午做涂片前我发现两大鼠还一直扒着笼沿站着,这样依旧能发现不少精子细胞,所以我想只要仔细观察,应该不会漏检掉精子.1 d' ~1 X4 {9 S
2 K) j, R5 G" I, q4 P' M& a

6 ]! J  w* z9 Z6 i# c4 W3 H, H8 b7 t: M2 B2 X6 h

* q3 P5 m. r6 e& W% ]9 u  m: ~; i/ k

( [2 p7 T* O8 r; t* ~* y2 |
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